Propõe-se um método de processamento de imagem para resolver o problema da dificuldade em contar gotículas causada pelo grande número, pequeno tamanho, disposição compacta e intensidade de fluorescência desigual na reação em cadeia da polimerase digital por gotículas (ddPCR) para detecção de ácidos nucleicos. O método coleta informações da imagem com base na varredura de tons de cinza, classifica e conta as gotículas por meio da análise diferencial, conseguindo coletar com precisão as informações da imagem do experimento ddPCR. Ruídos na imagem são removidos por um algoritmo de convolução, e o contraste da imagem é melhorado por equalização da distribuição de tons de cinza. A imagem é binarizada por varredura de tons de cinza em cada limiar, e a quantidade de gotículas é contabilizada sob restrições geométricas. A análise diferencial dos dados fornece os resultados da contagem de gotículas fluorescentes e de todas as gotículas. No experimento ddPCR utilizando DNA genômico humano (gDNA) como amostra, a precisão média de detecção desse algoritmo foi de 99,36%, representando um aumento de 2,24% e 2,53% em relação aos algoritmos comerciais e similares, respectivamente. Este método fornece resultados confiáveis para experimentos ddPCR, sendo mais adequado para experimentos ddPCR.

Detecção de pontos fluorescentes; PCR digital por gotículas; detecção de ácidos nucleicos; processamento de imagens; análise de imagens