数字液滴PCR图像的荧光信息提取

李姗姗; 王子超; 于成壮; 魏春阳; 李军委

doi:10.37188/OPE.20223007.0821

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数字液滴PCR图像的荧光信息提取

信息科学 | 更新时间：2022-04-22

- 数字液滴PCR图像的荧光信息提取
- Extraction method for fluorescence information from droplet digital PCR images
- 光学精密工程 2022年30卷第7期页码：821-829
- 作者机构：
  
  1.河北工业大学机械工程学院，天津 300401
  2.河北省智能传感与人机融合重点实验室，天津 300130
  3.电工装备可靠性与智能化国家重点实验室，天津 300132
  4.河北工业大学生物物理研究所，天津 300401
- 作者简介：
  
  [ "李姗姗（1983-），女，山东德州人，教授，2014年于哈尔滨工业大学获得博士学位，主要从事微流体控制、微传感与检测、微系统集成等方面的研究。E-mail： sli_mems@hebut.edu.cn" ]
  [ "李军委（1981-），男，河北石家庄人，副教授，2015年于河北工业大学获得博士学位，主要从事微传感与检测、药物筛选等方面的研究。E-mail： junwei_li@hebut.edu.cn" ]
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金资助项目(51728502);河北省重点研发计划资助项目(19271707D);河北省自然科学基金资助项目(E2020202101;F2021202001;2022202127);河北省引进留学回国人员资助项目(C20200314;C20210337);江苏省食品先进制造装备技术重点实验室项目(FMZ202016);天津市特支青年拔尖人才计划资助项目(180191)
- DOI：10.37188/OPE.20223007.0821
  中图分类号： TH79
- 收稿日期：2021-10-21，
  
  修回日期：2021-11-10，
  
  纸质出版日期：2022-04-10
- 稿件说明：
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李姗姗,王子超,于成壮等.数字液滴PCR图像的荧光信息提取[J].光学精密工程,2022,30(07):821-829.

LI Shanshan,WANG Zichao,YU Chengzhuang,et al.Extraction method for fluorescence information from droplet digital PCR images[J].Optics and Precision Engineering,2022,30(07):821-829.
李姗姗,王子超,于成壮等.数字液滴PCR图像的荧光信息提取[J].光学精密工程,2022,30(07):821-829. DOI： 10.37188/OPE.20223007.0821.

LI Shanshan,WANG Zichao,YU Chengzhuang,et al.Extraction method for fluorescence information from droplet digital PCR images[J].Optics and Precision Engineering,2022,30(07):821-829. DOI： 10.37188/OPE.20223007.0821.

摘要

针对数字液滴聚合酶链式反应（droplet digital Polymerase Chain Reaction， ddPCR）核酸检测中数字聚合酶链式反应由液滴数量多、尺寸小、排列紧密、荧光强度不均匀而导致的液滴难以计数问题，提出一种图像处理方法，基于灰度遍历法采集图像的信息，通过微分分析法对液滴进行分类和计数，可准确采集ddPCR实验的图像信息。通过卷积算法去除图像中的噪声，使用灰度分布均衡化法增强图像的对比度。以灰度遍历的方式将图像在逐个阈值下二值化，并以几何条件为限制统计液滴数量。通过微分分析法对数据进行分析，得出荧光液滴与全部液滴的计数结果。在以人类gDNA（genomic DNA）为检测样本的ddPCR实验中，该算法的平均检测准确率为99.36%，与商用仪器算法和同类算法相比分别提高了2.24%，2.53%。该方法为ddPCR实验提供了可靠的检测结果，可更好地适用于ddPCR实验。

Abstract

Droplet digital polymerase chain reaction （ddPCR） is one of the main methods used in nucleic acid detection. Counting the droplets in ddPCR experiments can be difficult if the number of droplets is too high or low， the fluorescence intensity is uneven， or the droplets are too closely arranged. We propose an image analysis method in which the image information is collected via the gray traversal method and droplets are classified and counted by differential analysis. Noise is removed from the image using the convolution algorithm， and the gray contrast of the image is enhanced by gray distribution equalization. The image is then converted to binary form by the gray traversal method with the geometric conditions taken as screening conditions， and the number of droplets is counted by differential analysis. Experiments with human gDNA （genomic DNA） as a detection sample， with approximately 20 000 droplets， showed an average detection accuracy of 99.36 % as compared to those conducted using commercial instrument algorithms or similar， with an average improvement of 2.24 % and 2.53 %， respectively， in the detection accuracy. The developed method can therefore be considered to provide reliable results and is suitable for use in ddPCR experiments.

关键词

Keywords

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